Expression of herpes simplex virus thymidine kinase, mediated by vaccinia virus early promoters

Expression of herpes simplex virus thymidine kinase, mediated by vaccinia virus early promoters

Expression of herpes simplex virus thymidine kinase, mediated by vaccinia virus early promoters
Infection for the first time with an alphaherpesvirus leads to active replication of the virus in epithelial cells at the portal of entry. An understanding of the mechanism of ICP22 function has been complicated by the coexpression of the full-length protein with an in-frame, C-terminus-specific protein, US1.5. Previous studies did not reveal the minimal promoter region that enabled transcriptional activation specific to breast cancer cells. To explore how Vhs is targeted to preferred sites, we examined the in vitro degradation of a target mRNA in rabbit reticulocyte lysates containing in vitro-translated Vhs. The results demonstrate that nucleotide sequences upstream from the second ATG codon can be removed without affecting the TK+ phenotype. Incubating the virus with RC-2 or applying the peptide in 2% methylcellulose to the cornea before viral infection significantly reduced the severity of ocular disease, but postinfection treatment with 0.1% RC-2 in PBS with or without 2% methylcellulose did not. The strength of two vaccinia early promoters (VpT38, PF) relative to that of the VV-TK promoter was deduced from HSV-TK activities induced by comparable vaccinia virus recombinants.

These studies demonstrate that the promoter region of the LATs contains a functional cAMP-response element and that expression of the LATs is likely controlled by second messenger signal transduction and imply a role for cAMP in triggering viral reactivation. Les niveaux d’activité enzymatique HSV-TK induite par ces recombinants ont été comparés à celui obtenu avec le promoteur du gène de la thymidine-kinase du virus vaccinal (VV-TK) dans le recombinant VMM5-TK. L’insertion de VpT38 permet d’exprimer dix fois plus d’enzyme HSV-TK que le promoteur VV-TK, ce qui reflète une activité dix fois plus élevée du promoteur VpT38 car les ARNm ont une structure similaire. Les niveaux de l’activité enzymatique induite par les autres recombinants VpT varient entre une et dix fois celle exprimée par le recombinant VMM5-TK, mais ces mesures ne reflètent sans doute pas la force relative des promoteurs car les ARNm correspondants n’ont pas la même séquence nucléotidique à leur extrémité 5′. Common sites of infection include the shaft and head of the penis, scrotum, inner thighs, and anus in men; and the labia, vagina, cervix, anus, and inner thighs in women. Par contre, une réduction significative d’activité HSV-TK (30 à 75 %) est observée pour les six autres recombinants VpT, suggérant que les gènes précoces correspondants continuent à être exprimés lors de la phase tardive de l’infection. La force de deux promoteurs précoces du virus de la vaccine (VpT38, PF), relativement à celle du promoteur VV-TK, a été déduite des activités enzymatiques que nous avons mesurées.

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